鸡肾炎病毒的分离培养
时间:2012-03-08
来源:本网采编
1、细胞培养 ANV不能在鸭胚成纤维细胞或其他已建立的哺乳类细胞系(如Hela、Vero、PK-15和MDCK)中生长。
一般是用鸡肾细胞(CKC)进行ANV的培养与增殖,能够产生细胞病变(CPE);病料接种已长成单层的细胞,感染后24小时病毒滴度最高,在接种后72小时细胞出现圆细胞型CPE,但不产生包涵体和血凝素。
2、鸡胚接种 选择6日龄的SPF鸡胚或无ANV抗体的胚进行卵黄囊接种,感染后3~14天内死亡,鸡胚全身性出血、水肿、绒毛尿囊膜肥厚,生长停滞;接种9天以后才死亡的鸡胚,其胎儿严重发育不良,比正常胎儿要明显小得多;如果经绒毛尿囊膜突进接种,则胎儿很少发生死亡。病毒分离物能通过50纳米微孔滤膜。
3、易感鸡接种试验 对1日龄SPF雏鸡用处理过的病料或用胚胎制备的50%组织悬液经腹腔内接种不表现临床症状,但生长停滞;而经口腔接种,可在感染后3—7天肾脏出现肉眼可见病变。用特异性的抗ANV荧光抗体染色受感染肾脏组织切片或细胞培养物检查病毒抗原,可以作为疾病早期诊断的一种手段。
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